Hoechst 33258活细胞和固定的细胞均可标记

Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，它在嵌入双链 DNA 后释放强烈的蓝色荧光，对细胞的毒性较低，常被称为DNA探针。实验研究中Hoechst 33258常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测，也可以用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。活细胞和固定的细胞均可标记。

使用方法

配制储存液

用水配制成10mg/ml的母液于4℃避光保存。染色工作浓度0.5-10μg/ml。

A：固定的细胞或组织染色

免疫荧光染色完毕后按后续步骤进行Hoechst33258细胞核染色。如果不进行其它染色，则直接按后续步骤进行Hoechst33258细胞核染色。

1) 对于贴壁细胞或组织切片：加入适量Hoechst 33258工作液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。

2) 吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。 

3) 封片后荧光显微镜下观察。激发波长350nm，发射波长460nm。

B：活细胞或组织染色

1) 细胞培养物中加入适量Hoechst 33258染色液，充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1ml染色液，对于96孔板一个孔需加入100μl染色液。     

2) 在 37℃培养细胞 10～20 分钟。

3) 用 PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

4) 封片后荧光显微镜下观察。激发波长350nm，发射波长460nm。

储存温度：-20℃避光