信帆生物提供PCR技术服务,Q-PCR技术服务,RT-PCR实验代做!
南京信帆生物提供 PCR实验代测,实时荧光定量PCR实验代测,RT-PCR代测。客户只需要提供样本,其他所有试剂都由本公司提供。一般7-10天出结果,提供原始数据,分析数据,实验报告,实验室所用仪器型号,图片,动力扩增曲线等。我们有的设备加上技术娴熟的实验操作人员,一定让您的每一份实验结果均真实可靠,咨询!
简介:
Real -Time PCR,即实时监测PCR扩增产物并进行解析的方法,它是在PCR反应体系中加入荧光物质,并通过Real -Time PCR检测系统对PCR反应进程中的荧光信号强度进行实时监测,zui终对实验数据进行分析处理的方法。Real -Time PCR自1996年由美国Applied Biosesystems公司推出以来,广泛应用于生物研究的各个领域。目前主要有SYBR Green 染料、Taqman探针法两种。
PCR实验代测,荧光定量PCR代测服实验室试剂的操作
1)所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。
2)所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水,用0.22μm过滤的,并且是高压灭菌。
3)在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂,在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。
4)所用试剂都应该以大体积配制,实验一下看试剂是否满意,然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。
5)所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子。
6)新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。
7)样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存
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操作程序 :
1.在无菌的Eppendorf管内加入以下反应物:
2.93℃ 反应2 min后开始以下循环:
93℃变性反应1 min;
50℃退火反应1 min;
72℃延伸反应3 min。
经过17~35循环后,zui后一个循环72℃增加5 min。循环结束后反应产物置于40℃保存。
3.取1~5ml反应产物走凝胶电泳,经溴化乙锭染色检测扩增的情况。
PCR技术服务,Q-PCR技术服务,RT-PCR实验代做
PCR实验代测,荧光定量PCR代测服主要仪器及耗材
旋涡振荡器 :上海青浦泸西仪器厂产品
手握式电动匀浆机:德国FLUKO 公司产品
低温冷冻离心机:Sigma(3K15)公司产品
Real-time检测仪:ABI (ABI-7300)公司产品
超纯水分离系统:美国LABCONCO公司
离心管及10μL、200μL、1000μL枪头等常规耗材均为国产;RNA提取过程中所需的离心管、枪头等耗材经过0.1%的DEPC水浸泡过夜,121℃灭菌30min,烘干后备用。
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