免疫组化操作步骤
⑴、石蜡切片脱蜡至水。
⑵、 3%H 2 O 2 室温孵育 5-10 分钟,以消除内源性过氧化物酶的活性。
⑶、蒸馏水冲洗, PBS 浸泡 5 分钟 x2 (如需抗原修复,可在此步后进行)。
⑷、 5-10% 正常山羊血清(PBS 稀释)封闭,室温孵育 10 分钟,倾去血清,勿洗。滴加 一抗 工作液, 37 ℃ 孵育 1-2 小时或 4 ℃ 过一晚。
⑸、 PBS 冲洗, 5 分钟 x3 次。
⑹、滴加适量 生物素标记二抗工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分钟。
⑺、 PBS 冲洗, 5 分钟 x3 次。
⑻、滴加适量的 辣根酶或碱性磷酸酶标记的链霉卵白素工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分钟。
⑼、 PBS 冲洗, 5 分钟 x3 次。
⑽、显色剂显色 3-15 分钟(DAB 或 NBT/BCIP)
⑾、自来水充分冲洗,复染,脱水,透明,封片。
免疫组化染色步骤
冰冻切片 4-8um ,室温放置 30 分钟后,入 4 ℃丙酮固定 10分钟,PBS洗,5分钟x3,用过氧化氢孵育5-10分钟,消除内源性过氧化物酶的活性。
免疫组化判定分析
免疫组化染色(IHC)
从实验结果而言,免疫组化技术服务主要涉及抗体实验结果的描述与分析,图片的确定与选取,相关数据的提供,上述工作是免疫组化工作的重点内容,只有严格的实验设计,标准的实验操作,专业化的结果分析才能更好的满足客户的要求,这点对于形式为腹水,上清,培养液之类的抗体显得更为重要。关于上述服务内容应该在实验开始前由双方明确,一般而言,客户方实验前应提出需要什么样的结果与分析,例如是简要还是详细的描述实验结果,需要实验数据否,图片的数量与规格等。如果为双盲试验或有第三方参与,则事先申明。
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